抗壞血酸過(guò)氧化物酶(APX)活性檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品名稱(chēng):：  抗壞血酸過(guò)氧化物酶(APX)活性檢測(cè)試劑盒 微量法

產(chǎn)品英文名:  Micro Ascorbate Peroxidase (APX) Assay Kit

產(chǎn)品貨號(hào)：BC0225           產(chǎn)地：北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷8三樓

產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣            產(chǎn)品商標(biāo)：solarbio
保存與運(yùn)輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價(jià)格：1300
庫(kù)存狀態(tài)：現(xiàn)貨                          
關(guān)鍵字:  抗壞血酸過(guò)氧化物酶檢測(cè)試劑盒|APX檢測(cè)試劑盒|抗壞血酸過(guò)氧化物酶|試劑盒

簡(jiǎn)要介紹：
APX 是植物清除活性氧的重要抗氧化酶之一，也是抗壞血酸代謝的關(guān)鍵酶之一。APX具有多種同功酶，分別定位于葉綠體、胞質(zhì)、線粒體、過(guò)氧化物和乙醛酸體，以及過(guò)氧化體和類(lèi)囊體膜上。APX 催化H2O2 氧化AsA，是植物AsA的主要消耗者。APX 的活性直接影響到AsA 的含量，在脅迫和解脅迫條件下，APX 與AsA 具有一定的負(fù)相關(guān)性。
    APX催化H2O2氧化AsA，通過(guò)測(cè)定AsA 的氧化速率，可計(jì)算得APX 活力。


產(chǎn)品詳細(xì)描述
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：液體60mL×2瓶，4℃保存。
試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加3 mL蒸餾水充分溶解。
試劑三：液體3mL×1瓶，4℃保存。
產(chǎn)品說(shuō)明：
APX 是植物清除活性氧的重要抗氧化酶之一，也是抗壞血酸代謝的關(guān)鍵酶之一。APX具有多種同功酶，分別定位于葉綠體、胞質(zhì)、線粒體、過(guò)氧化物和乙醛酸體，以及過(guò)氧化體和類(lèi)囊體膜上。APX 催化H₂O₂ 氧化AsA，是植物AsA的主要消耗者。APX 的活性直接影響到AsA 的含量，在脅迫和解脅迫條件下，APX 與AsA 具有一定的負(fù)相關(guān)性。
APX催化H₂O₂氧化AsA，通過(guò)測(cè)定AsA 的氧化速率，可計(jì)算得APX 活力。
試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：
低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔UV板、移液槍、研缽、冰和蒸餾水。

操作步驟：
一、粗酶液提取 ：   
 稱(chēng)取約0.1g樣品，加1 mL試劑一，冰上充分研磨，13000g  4℃離心20min，取上清液。
二、測(cè)定操作表：
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到265 nm，用蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑一在25℃中預(yù)熱30min以上。
3. 空白管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL蒸餾水、140μL預(yù)熱的試劑一、20μL試劑二和20μL試劑三，迅速混勻后在290nm測(cè)定10s和130s光吸收A1和A2，△A空白管=A1-A2。
4. 測(cè)定管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μL上清液、140μL預(yù)熱的試劑一、20μL試劑二和20μL試劑三，迅速混勻后在290nm測(cè)定10s和130s光吸收A3和A4，△A測(cè)定管=A3-A4。
三、APX 活力計(jì)算：
a.使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
（1）按蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義：每毫克蛋白每分鐘氧化1μmol AsA 為1U。
APX(U/mg prot) = (△A測(cè)定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反總×10⁶÷(Cpr×V樣)÷T
=1.79×(△A測(cè)定管-△A空白管) ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算
活性單位定義：每克樣品每分鐘氧化1μmol AsA 為1U。
APX(U/g 鮮重) = (△A測(cè)定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反總×10⁶÷(V樣÷V樣總×W)÷T
=1.79×(△A測(cè)定管-△A空白管) ÷W
    ε：AsA在290nm處摩爾吸光系數(shù)為2.8×10³ L/mol/cm；d：比色皿光徑（cm），1 cm；V反總：反應(yīng)體系總體積（L），200μL=2×10^-4 L；10⁶：1mol=1×10⁶μmol；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度（mg/mL），需要另外測(cè)定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒；W ：樣品質(zhì)量，g；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積（mL），20μL=0.02mL；V樣總：加入試劑一體積，1mL；T：催化反應(yīng)時(shí)間（min），2min。
b.使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
（1）按蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義：每毫克蛋白每分鐘氧化1μmol AsA 為1U。
APX(U/mg prot) = (△A測(cè)定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反總×10⁶÷(Cpr×V樣)÷T
=3×(△A測(cè)定管-△A空白管) ÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算
活性單位定義：每克樣品每分鐘氧化1μmol AsA 為1U。
APX(U/g 鮮重) = (△A測(cè)定管-△A空白管)÷(ε×d)×V反總×10⁶÷(V樣÷V樣總×W)÷T
=3×(△A測(cè)定管-△A空白管) ÷W
    ε：AsA在290m處摩爾吸光系數(shù)為2.8×10³ L/mol/cm；d：96孔板光徑（cm），0.6 cm；V反總：反應(yīng)體系總體積（L），200μL=2×10^-4 L；10⁶：1mol=1×10⁶μmol；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度（mg/mL），需要另外測(cè)定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒；W ：樣品質(zhì)量，g；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積（mL），20μL=0.02mL；V樣總：加入試劑一體積，1mL；T：催化反應(yīng)時(shí)間（min），2min。
 

相關(guān)文獻(xiàn)：

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